Practica 5

Practica Nº 5

CONOCIMIENTO Y USO DEL MICROSCOPIO

Objetivo general:

Que el alumno aprenda a manejar correctamente el microscopio, y conocer su utilidad en el laboratorio.

Objetivos particulares:

1. Enfocar correctamente cualquier muestra que se coloque en el microscopio

2. Aprender a mantener en buen estado un microscopio

3. Establecer qué clase de muestras se pueden colocar en el microscopio

INTRODUCCION

El microscopio simple utilizado por Anton Van Leeuwenhoeek en el siglo XVII tenía una sola lente y era similar a una lupa pero Van Leeuwenhoeek era el mejor tallador de lentes del mudo de su tiempo. Tallaba sus lentes con tanta precisión que una lente solo podía aumentar un microbio 300x y gracias a sus microscopios simples fue la primera persona que pudo ver las bacterias.

Los contemporáneos de Leeuwenhoeek, como Hooke construyeron microscopios compuestos, con múltiples lentes, de hecho se le adjudica al óptico holandés Zacharias Janssen la construcción del primer microscopio compuesto alrededor de 1600. Sin embargo estos primeros microscopios compuestos eran de baja calidad y no podían utilizarse para observar bacterias. Recién en 1830 Joseph Jackson Lister (el padre de Joseph Lister) construyo un microscopio de una calidad mucho mayor .Varias mejoras del microscopio de Lister dieron como resultado el desarrollo del microscopio compuesto moderno, que es el tipo utilizado en la actualidad en los laboratorio de microbiología. Los estudios microscópicos de muestras de materia viva han revelado interacciones espectaculares entre los microbios.

El termino microscopia óptica se refiere al empleo de cualquier clase de microscopios que utilice la luz visible para observar las muestras.

La microscopia es el método que se utiliza con mayor frecuencia tanto para la detección directa microorganismos en las muestras médicas como para la caracterización de los microorganismos que crecen en los cultivos.

La microscopia se define como el empleo de un microscopio para aumentar de tamaño (es decir un agrandamiento visual) objetos demasiados pequeños para ser observados a simple vista con el propósito de que puedan verse con facilidad sus características. Dado que la mayoría de los agentes infecciosos no pueden detectarse a simple vista, la microscopia desempeña un papel importante en el laboratorio. Los microscopios y los diferentes métodos de observación microscópica son varios pero aquí solo se describirán los más utilizados en el diagnostico microbiológico. Los tipos de microorganismos que se van a detectar, identificar y caracterizar determinan los tipos de microscopia que es más apropiada emplear.

Los cuatro tipos de microscopias más utilizadas en el diagnostico microbiológica son:

Microscopia de campo claro (conocida también como microscopia de luz u óptica),

Microscopia de fluorescencia, Microscopia de campo obscuro y la Microscopia electrónica.

1. Estructura y manejo del microscopio óptico

Las partes esenciales que componen un microscopio óptico son:

Parte mecánica

Pie o soporte:

Sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de iluminación.

Platina:

Superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se encuentra un orificio

que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema de pinza o similar, para sujetar

el portaobjetos con la preparación, y unas escalas que ayudan a conocer qué parte de la

muestra se está observando. La platina presenta 2 tornillos, generalmente situados en la

parte inferior de la misma, que permiten desplazar la preparación sobre la platina, en sentido

longitudinal y transversal respectivamente.

Tubo:

Cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte de oculares y

objetivos.

Revólver porta objetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.

Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el microscopio para

trasladarlo de lugar.

Tornillo macrométrico o de enfoque grosero:

Sirve para obtener un primer enfoque de la muestra al utilizarse el objetivo de menor

aumento. Desplaza la platina verticalmente de forma perceptible.

Tornillo micrométrico o de enfoque fino:

Sirve para un enfoque preciso de la muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el

macrométrico. También desplaza verticalmente la platina, pero de forma prácticamente

imperceptible. Es el único tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer

enfoque, al ir cambiando a objetivos de mayor aumento.

Parte óptica

Oculares:

Son los sistemas de lentes más cercanos al ojo del observador, situados en la parte superior

del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes convergentes cuyo aumento se

reseña en la parte superior de los mismos (normalmente 10X en los microscopios que se

utilizarán en esta práctica). Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios

pueden se mono o binoculares.

Objetivos:

Son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del tubo, mediante

el revólver. En esta estructura se pueden acoplar varios objetivos (ordenados de forma

creciente según sus aumentos, en el sentido de las agujas el reloj). Un anillo coloreado es

distintivo de los aumentos de cada objetivo, que también van reseñados en el lateral del

mismo. Algunos objetivos no enfocan bien la preparación al aire, y se deben de utilizar con

un aceite de inmersión (normalmente van marcados con un anillo rojo). Estos objetivos de

inmersión no se utilizarán normalmente en estas prácticas.

Condensador:

Sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los concentra sobre la

preparación, de manera que proporciona mayor o menos contraste. Se regula en altura

mediante un tornillo (letra J de la figura).

Fuente de iluminación:

En los microscopios a utilizar, el aparato de iluminación está constituido por una lámpara

halógena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del microscopio. La luz procedente de la

bombilla pasa por un reflector que envía los rayos luminosos hacia la platina.

Diafragma o iris:

Sobre el reflector de la fuente de iluminación. Abriéndolo o cerrándolo permite graduar la

intensidad de la luz.

Transformador:

Ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es necesario para enchufar el

microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en el pie del microscopio. Además, el transformador dispone de un potenciómetro para regular la intensidad de la luz.

Montaje y enfoque de una preparación microscópica

Antes de observar la preparación al microscopio, esta debe de ser montada sobre vidrio.

Para ello existen dos piezas de vidrio denominadas portaobjetos (porta), que, como su

nombre indica, es el soporte sobre el que va la muestra, y cubreobjetos (cubre) que siempre

ha de colocarse sobre la muestra. Una vez colocada la muestra en el porta, se debe añadir

una gota de agua, o de la solución acuosa pertinente, antes de colocar el cubre, para evitar

interfaces agua-aire, que provocan zonas ciegas.

Para enfocar la preparación se ha de seguir de forma minuciosa el protocolo descrito debajo

de la figura.(DESARROLLO)

Consejos prácticos

1) En los microscopios que requieren transformador, el enchufe a la red y desenchufe

debe hacerse sobre el transformador, y nunca debe desenchufarse el microscopio del

transformador.

2) Se debe mantener apagada la luz del microscopio siempre que no se esté utilizando,

ya que la vida media de la bombilla es corta.

3) Siempre se debe comenzar el enfoque con el objetivo de menor aumento.

4) Anotar siempre el número de aumentos con el que se observa la preparación. Para

calcularlo basta multiplicar el número de aumentos del objetivo por el de los oculares.

Hacer esquemas y dibujos de lo observado con cada aumento.

5) Salvo que se indique lo contrario no utilizar nunca el objetivo de inmersión, ya que se

requiere un aceite especial sin el que, además de no enfocar bien, existe una gran

probabilidad de dañar la lente al rozar con el cubreobjetos.

6) Una vez enfocada, procurar recorrer, con los tornillos de la platina, toda la

preparación. El microscopio, además de una gran herramienta en biología, es un gran

juguete para disfrutar de él descubriendo el apasionante mundo de lo pequeño, para

ello, hay que rastrear todo este mundo.

El Microscopio Óptico:

 (A) Oculares

(B) Revolver

(C) Objetivos

(D) Platina

(E) Tornillos Para Desplazar La Preparación Sobre

La Platina En Sentido Longitudinal Y Transversal

(F) Condensador

(G) Tornillo Macro métrico

(H) Tornillo Micrométrico

( I ) Diafragma Iris

(J) Tornillo Para Regular La Altura Del Condensador

(K) Interruptor

(L) Regulador De La Intensidad De Luz

(M) Pinzas Para Ajustar La

(N) Preparación Sobre La Platina

Pie O Soporte

Material:

- Muestra de heces fecales

- Agua estancada

- Microscopio

- Porta objetos cubre objetos

- Franela

- Pipeta Pasteur

- Lugol

Desarrollo:

Enfoque Del Microscopio

Los pasos a seguir para la perfecta utilización del microscopio son las siguientes:

a) Enchufar el microscopio al transformador y éste a la red.

b) Colocar la preparación sobre la platina de forma que la estructura a observar quede en

el orificio central de la platina.

c) Poner el objetivo de menor aumento cuyo amplio campo visual facilita el hallazgo de

estructuras importantes.

d) Subir la pletina accionando el tornillo micrométrico y mirando la preparación desde

fuera hasta alcanzar el tope superior. En ningún caso tocar la preparación con los

objetivos.

e) Mirando por los oculares, bajar lentamente la platina con el tornillo macro métrico

hasta conseguir ver el objeto lo más nítido posible.

f) Ajustar el enfoque con el tornillo micrométrico hasta verlo claramente.

g) Para observar la preparación a mayores aumentos cambiar de objetivo con un simple

giro del revólver. Las pequeñas variaciones que se observan en el enfoque se

producen al cambiar de objetivo y se corrigen con el micro.

h) Para observar otros campos, desplazar la preparación moviendo los tornillos de la

platina.

Para cambiar la preparación:

Bajar la platina.

Colocar el objetivo de menor aumento

Quitar la preparación y colocar la siguiente

Para desconectar el microscopio, además de los tres pasos anteriores se realiza lo

siguiente:

 Apagar y desenchufar el transformador de la red

 Tapar el microscopio con su funda

SEGUNDA PARTE

ACTIVIDAD EXPERIMENTAL:-

En el desarrollo de esta actividad se utilizaran 2 tipos de preparaciones:

a) Preparaciones frescas o húmedas

b) Preparaciones fijas

Las primeras se realizan unos minutos antes de su observación y se pueden utilizar

una gran diversidad de materiales como. Tejidos vegetales y animales, eritrocitos,

bacterias etc., pero existe un inconveniente este tipo de preparaciones no podemos

guardarla por mucho tiempo.

Una preparación fija se puede guardar por un tiempo indefinido, para prepararla

podemos utilizar el material a observar (pueden ser esporas, células,

microorganismos, cortes de tejidos etc.), al cual se le agrega resina sintética, cera o

bálsamo de Canadá y finalmente se le coloca un cubreobjetos. Al hacer la fijación se

debe evitar que queden burbujas de aire en la preparación porque distorsiona la

imagen

MATERIAL Y EQUIPO

MUESTRAS

Microscopio compuesto Cultivos bacterianos y de hongos

Portaobjetos 1 cabello claro y 1 cabello oscuro

Cubreobjetos Agua estancada

1 frasco gotero 1 hoja vegetal

Papel absorbente Preparaciones fijas

Pinzas de disección 1 muestra pequeña de tejido muscular de pollo

Agujas de disección 1 insecto pequeño (zancudo, piojo, pulga etc.)

Una caja de petri desechable Aceite de inmersión

Colorantes(opcional)

Manual de Practicas

Procesar Técnicas Bacteriológicas Básicas Página 37

Desarrollo

I.-Preparaciones húmedas o frescas:

 Realiza un montaje húmedo con muestras de cultivos bacterianos y de hongos por

separado de la siguiente manera:

 De las cajas que contiene los cultivos, tomar una pequeña muestra y colocarla sobre

un portaobjetos, agregar una gota de colorante y diluir la muestra de cultivo con ayuda

de una aguja de disección, colocar un cubreobjetos y observa al microscopio.

 Enfoca el microscopio como se menciono anteriormente y realiza las observaciones

correspondientes.

 Elabora un esquema de cada una de las observaciones, anota en la parte inferior en

número de aumentos con los que observaste (10X y 40X) que corresponden al

enfoque realizado.

 Realiza las preparaciones en fresco del insecto, tejido vegetal, tejido animal, cabellos

y agua estancada siguiendo el procedimiento realizado anteriormente.

 Anota tus observaciones y dibujos correspondientes.

Preparaciones fijas

 Realiza las observaciones de las preparaciones fijas que te proporciones el profesor,

con el objetivo 10X, 40X y 100X (en este objetivo agregaremos una gota de aceite de

inmersión a la preparación para observarla).

 Anota las observaciones y dibuja.

RUTA DE TRABAJO

RESULTADOS:

Dibujos de cada una de las preparaciones, en fresco y fijas, con los aumentos

utilizados.

DISCUSION:

CONCLUSION:

BIBLIOGRAFIA