Practica 7

Prática No. 7

TÉCNICAS DE SEMBRADO MICROBIOLÓGICO

Objetivo general

 Que el alumno aprenda a realizar correctamente las técnicas de sembrado que se

utilizan con más frecuencia en microbiología.

Objetivos particulares.

1.- Realizar correctamente las estrías masivas en un medio de cultivo

2.- Conocer qué medidas se toman para realizar un buen estriado

3.- Conocer el tipo de estriado según la caja de petri que se utilice

Introducción.

Un método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio líquido o en la

superficie de un medio sólido de agar.

Los cultivos de bacterias provenientes de infecciones en diversos sitios corporales se llevan

a cabo mediante la siembra de muestras procesadas directamente en los medios

artificiales.los medios de cultivo y las condiciones de incubación se seleccionan de acuerdo

con su capacidad para favorecer el crecimiento de las bacterias con mas probabilidades de

estar implicadas en el proceso infeccioso.

Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azucares simples hasta

sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar

una especie bacteriana a partir una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se

siembra en un medio de cultivo sólido, donde las células que se multiplican no cambian de

localización tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión

binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de células similares a

la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como

cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

El estudio organizado de cualquier microorganismo requiere que se examine una especie a

la vez, el método analítico no se puede aplicar cuando se trata de una mezcla de varias

especies a la vez. Uno de los problemas más frecuentes en microbiología es el aislamiento

de un cultivo puro de una especie bacteriana dada.

Sin duda la técnica más comúnmente usada es la de estría cruzada, empleada para lograr un

cultivo puro, método llamado también sembrado en estría. El material que se recomienda

para la siembra es un alambre de nicromo o platino en forma recta en forma de asa, un

extremo del alambre se inserta a un mango cilíndrico para facilitar su manejo. Esta técnica

incluye la diseminación de una azada de material con los microorganismos sobre la

superficie de un medio de agar que se ha solidificado.

El propósito de esta técnica es diluir el inoculo sobre la superficie del agar como para poder

obtener colonias bacterianas bien aisladas a partir de Unidades Formadoras de Colonias

(UFC). Las colonias aisladas se pueden luego subcultivar individualmente transfiriéndolas a

otros medios a fin de obtener cultivos puros que pueden ser estudiados.

Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es imposible

diferenciarlas solo con el uso de microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de

bacteria, se estudian sus características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo

especiales.

En algunos medios se añaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los

nutrientes del medio es fermentado y se generan catabólicos ácidos.

Si las bacterias son capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser

apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.

Material.

 Franela

 Masking tape

 Marcador indeleble

 Encendedor

 Asa bacteriológica de 1 en 100

 Hisopos estériles

 Abate lenguas

 Guantes

 Gasas

 Cepas bacterianas

Procedimiento

Aislamiento de un cultivo bacteriano en placa por el Método de estría cruzada

1) Desinfectar perfectamente el área de trabajo con el desinfectante que se utiliza

rutinariamente y en seguida prenda el mechero y espere ente 3-5 minutos para

trabajar dentro del área de seguridad que proporciona la flama del mechero (no mayor

de 30 cm de diámetro).

2) Realizar el trabajo sentado, cerca del mechero, esterilizar el asa por método de flameo

correspondiente hasta llevar al rojo vivo.

3) Enfriar el asa contando de 20 o 30 segundos o bien en uno de los extremos de la

placa de agar que podrá servir como punto inicial cuando se desarrolle la técnica de

estría cruzada en cada uno de los extremos de la placa.

4) Después tomar una azada de la muestra (cultivo bacteriano en caja de Petri, en tubo

de ensaye, cultivo bacteriano mixto en caldo o muestra biológica).

5) A continuación tomar con la mano izquierda la caja de Petri si es diestro, o con la

derecha si es surdo, de manera que la base de la caja repose sobre la palma de la

mano y la tapa pueda manipularse hacia arriba y hacia abajo con el dedo pulgar y el

dedo medio.

6) Levantar la cubierta de la caja de Petri y colocar en la superficie del agar el inoculo de

lado a lado, trazando 5 líneas paralelas continuas como se muestra en la figura 1.

7) Bajar la cubierta de la caja y flamear el asa de inocular.

8) Hacer girar la caja de Petri un cuarto de vuelta, levantar la cubierta y enfriar el asa de

inocular nuevamente contando de 20 a 30 segundos o bien tocando el agar del medio

de cultivo lejos del conjunto de estrías recién hechas.

9) Realizar 5 líneas paralelas continuas de lado a lado tocando la superficie del conjunto

original de estrías con el asa de inocular, formado de esta manera el segundo

conjunto de estrías (ver figura 2).

10)Bajar la tapa de la caja y repetir los pasos 6, 7,8 y 9), formando el tercer (ver figura 3).

11)Nuevamente bajar la tapar y repetir los pasos del 6 al 10, solamente que para formar

el cuarto grupos de estrías estas serán más amplias y abiertas sin tocar ningún grupo

de estrías que ya esta hechas, ver figura 4.

12)Finalmente flamear el asa de inocular.

13)Colocar las cajas de Petri boca abajo y etiquételas con su nombre, grupo y equipo.

14)Incubar las cajas de Petri a 37 0C durante 24 - 48 horas en la estufa bacteriológica.

15)Tome fotografías frente al mechero para ver el estriado realizado y anexar a sus resultados.

Técnica de estría masiva

Con el asa previamente esterilizada, tomar una azada de una muestra y trazar una cruz en la

caja con el medio de cultivo a utilizar, posteriormente esterilizar el asa y estriar en toda la

caja procurando que las estrías sean lo más cercanas una de otra en toda la caja.(este

método se puede realizar con asa o con hisopo), como se muestra en la siguiente figura:

Ruta de trabajo:

Representar con dibujos o tomar fotografías del procedimiento realizado. Anexarlo a tus

resultados

RESULTADOS.

DISCUSIÓN.

CONCLUSIÓN.

BIBLIOGRAFÍA.